生物潔凈室無菌工藝試驗(yàn)

生物潔凈室無菌工藝模擬試驗(yàn)是采用微生物培養(yǎng)基代替產(chǎn)品對(duì)無菌工藝進(jìn)行評(píng)估的驗(yàn)證技術(shù)。無菌工藝模擬試驗(yàn)也被稱為培養(yǎng)基灌裝或培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)，通常需要將培養(yǎng)基暴露于設(shè)備、容器密封系統(tǒng)的表面和關(guān)鍵環(huán)境條件中，并模擬實(shí)際生產(chǎn)完成工藝操作。然后將裝有培養(yǎng)基的密封容器進(jìn)行培養(yǎng)以檢查微生物的生長，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，以確定實(shí)際生產(chǎn)中產(chǎn)品被污染的概率。

培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)需要模擬整個(gè)工藝過程，包括從部件、材料的滅菌準(zhǔn)備，配制混合，無菌過濾，灌裝，一直到完成容器密封的整個(gè)過程。培養(yǎng)基灌裝是用于評(píng)估整個(gè)無菌工藝過程，用以表明如果嚴(yán)格按照工藝要求生產(chǎn)，產(chǎn)品的無菌性有可靠保證；但須承認(rèn)，不管模擬試驗(yàn)還是實(shí)際生產(chǎn)總是存在差異的，因此不能將培養(yǎng)基灌裝結(jié)果與實(shí)際生產(chǎn)中的污染概率等同起來，即使獲得很好的培養(yǎng)基灌裝結(jié)果，也不能排除實(shí)際生產(chǎn)發(fā)生污染的可能性。

培養(yǎng)基灌裝應(yīng)在實(shí)際生產(chǎn)相同的條件(環(huán)境、設(shè)備等)下盡量模擬實(shí)際生產(chǎn)完成操作。應(yīng)充分考慮生產(chǎn)時(shí)可能造成污染的各種因素，應(yīng)對(duì)常規(guī)生產(chǎn)中的各種干擾活動(dòng)進(jìn)行模擬，應(yīng)模擬常規(guī)生產(chǎn)可能遇到的較差條件狀況下的操作。

1. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝技術(shù)

培養(yǎng)基的選擇和處理，培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)頻率，生產(chǎn)線較長允許運(yùn)行時(shí)間(長時(shí)間生產(chǎn)可能導(dǎo)致污染增加)，班次更換、暫停及必要的更衣，灌裝批次量，生產(chǎn)線的運(yùn)行速度及設(shè)置，實(shí)際生產(chǎn)可能出現(xiàn)的正常干擾次數(shù)、類型及復(fù)雜程度，以及非常規(guī)的干擾和活動(dòng)(如設(shè)備維修、中斷、設(shè)備的各種調(diào)整)，環(huán)境監(jiān)測(cè)方案和取樣操作，關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)較多可容納的總?cè)藬?shù)及人員可能的活動(dòng)，容器的密封系統(tǒng)(如規(guī)格、大小、類型、對(duì)設(shè)備的兼容性)，無菌條件下的運(yùn)輸、轉(zhuǎn)移次數(shù)(如容器轉(zhuǎn)移、加膠塞、加無菌原輔材料)，只有經(jīng)過培養(yǎng)基灌裝的人員才能參與實(shí)際無菌生產(chǎn)，培養(yǎng)基灌裝后應(yīng)隨即對(duì)生產(chǎn)設(shè)施和設(shè)備清洗和滅菌，避免殘留培養(yǎng)基造成污染。

2. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝培養(yǎng)基的選擇

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基(TSB) 是一種廣譜性培養(yǎng)基，特別對(duì)無菌工藝環(huán)境中源自人體的細(xì)菌、芽孢和真菌有良好的促生長效果，是無菌工藝模擬試驗(yàn)常用的培養(yǎng)基。如果產(chǎn)品需充入惰性氣體、儲(chǔ)存在無氧條件，無菌操作在嚴(yán)格的厭氧環(huán)境(即氧氣濃度低于0.1%)中進(jìn)行時(shí)，應(yīng)評(píng)估是否采用厭氧培養(yǎng)基。在厭氧的無菌工藝環(huán)境監(jiān)控中反復(fù)發(fā)現(xiàn)厭氧微生物或在產(chǎn)品無菌檢查中發(fā)現(xiàn)厭氧微生物時(shí)，需評(píng)估增加厭氧培養(yǎng)基。用于模擬抑菌性產(chǎn)品的培養(yǎng)基，如有必要需評(píng)估抑菌性產(chǎn)品對(duì)其促生長能力及模擬試驗(yàn)結(jié)果的影響。促生長試驗(yàn)的指示菌除了相關(guān)規(guī)定以外，還應(yīng)考慮使用環(huán)境監(jiān)控和無菌檢查中的分離菌，以代表實(shí)際生產(chǎn)中的可能遇到的污染菌，促菌生長試驗(yàn)的接種量應(yīng)不超過100CFU。

3. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝運(yùn)行試驗(yàn)次數(shù)及頻率

新建無菌生產(chǎn)線，在正式投產(chǎn)之前，每班次應(yīng)當(dāng)連續(xù)進(jìn)行3次合格的模擬試驗(yàn)。正常生產(chǎn)期間應(yīng)當(dāng)按照每條生產(chǎn)線每班次每半年進(jìn)行一次試驗(yàn)， 每次至少一批。 對(duì)于因其他原因停產(chǎn)一定周期的生產(chǎn)線，在恢復(fù)正式生產(chǎn)前應(yīng)進(jìn)行無菌工藝模擬試驗(yàn)。如是再驗(yàn)證，日常生產(chǎn)中，針對(duì)微生物污染事件而制定了糾正措施，在模擬試驗(yàn)時(shí)，可對(duì)糾正措施的有效性給予確認(rèn)。若空氣凈化系統(tǒng)、生產(chǎn)用設(shè)備、無菌生產(chǎn)工藝及人員有重大變更，或設(shè)備有重大維修后，應(yīng)評(píng)估確定無菌工藝模擬再試驗(yàn)的批次數(shù)，充分評(píng)估生產(chǎn)線的風(fēng)險(xiǎn)。在發(fā)現(xiàn)設(shè)施、人員、環(huán)境或工藝的持續(xù)監(jiān)測(cè)出現(xiàn)不良趨勢(shì)或無菌不合格時(shí)，也應(yīng)考慮再次進(jìn)行模擬試驗(yàn)。

4. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝數(shù)量及模擬持續(xù)時(shí)間

無菌工藝模擬灌裝數(shù)量應(yīng)足以保證評(píng)價(jià)的有效性及完成模擬方案中設(shè)計(jì)的各種干預(yù)活動(dòng)。應(yīng)通過評(píng)估對(duì)所設(shè)計(jì)的灌裝數(shù)量、持續(xù)時(shí)間、模擬方式、預(yù)期收率作出合理說明。

生產(chǎn)批量小于5000支，模擬灌裝批量應(yīng)至少與生產(chǎn)批量相同；產(chǎn)品的生產(chǎn)批量在5000~10000支，模擬灌裝數(shù)量應(yīng)與產(chǎn)品實(shí)際的生產(chǎn)批量相當(dāng)；大規(guī)模生產(chǎn)，即產(chǎn)品的生產(chǎn)批量大于10000支，較低模擬灌裝數(shù)量應(yīng)不得低于10000支；對(duì)于超大批量的生產(chǎn)規(guī)模，如大于100000支，則應(yīng)考慮適當(dāng)增加模擬的灌裝數(shù)量；如采用密封性生產(chǎn)設(shè)備，可適當(dāng)降低模擬數(shù)量。

5. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝運(yùn)行速度

培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)方案應(yīng)闡明生產(chǎn)線運(yùn)行的速度范圍，每次運(yùn)行試驗(yàn)中，應(yīng)對(duì)單一生產(chǎn)線的速度作出評(píng)估并說明鎖定速度的理由。比如大敞口容器的低速運(yùn)行一般適用于評(píng)估無菌產(chǎn)品、 容器、膠塞在無菌區(qū)暴露時(shí)間比較長的工藝，高速運(yùn)行則比較適用于評(píng)估那些存在大量手工干擾的生產(chǎn)工藝。

6. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝容器裝量

容器中培養(yǎng)基灌裝體積應(yīng)考慮適宜微生物生長的需要和容器內(nèi)表面覆蓋的要求。灌裝體積不必與產(chǎn)品相同，但合適的灌裝量既應(yīng)保證產(chǎn)品通過倒置和旋轉(zhuǎn)接觸到所有內(nèi)表面并有足夠的氧氣支持微生物的生長，又應(yīng)利于對(duì)培養(yǎng)基的觀察。

7. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝干預(yù)設(shè)計(jì)

干預(yù)是由操作人員按照相關(guān)規(guī)定參與無菌工藝生產(chǎn)的所有操作活動(dòng)。干預(yù)可分為固有干預(yù)和糾正性干預(yù)。固有干預(yù)是指常規(guī)和有計(jì)劃的無菌操作，如裝載膠塞、 環(huán)境監(jiān)控、設(shè)備安裝、部件組裝等；糾正性干預(yù)是對(duì)無菌生產(chǎn)過程的糾正或調(diào)整，如生產(chǎn)過程中清除破碎的瓶子、排除卡住的膠塞、更換部件、設(shè)備故障排除等。中凈環(huán)球凈化可提供生物潔凈室、無菌室的咨詢、規(guī)劃、設(shè)計(jì)、施工、安裝改造等配套服務(wù)。

無菌模擬試驗(yàn)方案中應(yīng)明確規(guī)定固有干預(yù)和糾正性干預(yù)的頻次、類型及復(fù)雜程度，如倒瓶剔除等進(jìn)行簡單干預(yù)；灌裝機(jī)泵及針頭裝配、設(shè)備故障維修等進(jìn)行復(fù)雜干預(yù)。固有干預(yù)及經(jīng)常發(fā)生的糾正性干預(yù)一般應(yīng)在每次模擬中都實(shí)施，偶發(fā)性的干預(yù)可周期性地模擬，如無菌生產(chǎn)過程意外暫?；蛑貑?，無菌狀態(tài)下設(shè)備、設(shè)施偶發(fā)故障排除等。

模擬試驗(yàn)應(yīng)設(shè)計(jì)并實(shí)施足夠數(shù)量的糾正性干預(yù)，干預(yù)頻次的設(shè)計(jì)應(yīng)考慮實(shí)際生產(chǎn)情況，按比例覆蓋模擬試驗(yàn)的全過程。對(duì)于無菌取樣、調(diào)整裝量過程，均應(yīng)考慮在分裝的前、中、后階段進(jìn)行。

實(shí)施干預(yù)的人員(應(yīng)包括操作、維修人員等)應(yīng)經(jīng)過相關(guān)的培訓(xùn)和考核，并能按規(guī)定的程序?qū)嵤└鞣N干預(yù)。標(biāo)準(zhǔn)化的、簡單的固有干預(yù)可由部分操作人員實(shí)施并據(jù)此評(píng)價(jià)其他人；對(duì)于復(fù)雜操作，如裝配灌裝機(jī)等，每個(gè)從事該操作的人員都應(yīng)在驗(yàn)證過程中模擬，操作條件不應(yīng)優(yōu)于日常生產(chǎn)的操作條件。

8. 生物潔凈室 干預(yù)后產(chǎn)品(容器)的處理

實(shí)際工藝中如明確規(guī)定受干預(yù)影響的產(chǎn)品(容器) 應(yīng)從生產(chǎn)線上剔除，在模擬試驗(yàn)時(shí)也可剔除；模擬試驗(yàn)時(shí)產(chǎn)生的這類產(chǎn)品(容器)可不培養(yǎng)，但不培養(yǎng)的容器應(yīng)予以記錄并評(píng)估其合理性；如在干預(yù)發(fā)生前已經(jīng)密封，在日常生產(chǎn)中按規(guī)定不需要剔除的產(chǎn)品，模擬試驗(yàn)時(shí)也應(yīng)保留、培養(yǎng)并納入評(píng)估。

模擬試驗(yàn)過程中的所有干預(yù)須記錄，糾正性干預(yù)記錄的內(nèi)容至少應(yīng)包括糾正性干預(yù)的類型、位置、次數(shù)；固有干預(yù)記錄至少包括干預(yù)內(nèi)容和發(fā)生頻率。

9. 生物潔凈室環(huán)境條件及監(jiān)測(cè)

培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的環(huán)境條件應(yīng)充分體現(xiàn)生產(chǎn)操作的實(shí)際情況，不應(yīng)該采取特別的生產(chǎn)控制和預(yù)防措施，制造特別良好的工藝環(huán)境，這樣會(huì)導(dǎo)致不準(zhǔn)確的評(píng)估結(jié)論，造成工藝條件良好的假象。需要注意的是，不應(yīng)當(dāng)人工創(chuàng)造極端的環(huán)境條件(如對(duì)凈化空調(diào)重新調(diào)整，使其在較差的狀態(tài)下運(yùn)行)進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)于環(huán)境較差條件的挑戰(zhàn)應(yīng)當(dāng)是在工藝允許的苛刻條件范圍內(nèi)對(duì)環(huán)境受干擾程度(如生產(chǎn)現(xiàn)場人員較多、生產(chǎn)活動(dòng)頻率較高)的挑戰(zhàn)。

在培養(yǎng)基灌裝過程中也應(yīng)當(dāng)進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測(cè)，環(huán)境監(jiān)測(cè)的方案可以與日常監(jiān)控不同，但監(jiān)測(cè)要求不能低于日常生產(chǎn)。

10.人員培訓(xùn)

所有被授權(quán)在生產(chǎn)時(shí)進(jìn)入無菌區(qū)的人員，包括觀察人員和維修人員，每年至少應(yīng)參加一次培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。所有實(shí)際生產(chǎn)中將在關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行操作的人員都應(yīng)該參加每次的培養(yǎng)基灌裝，參與人員應(yīng)按照常規(guī)生產(chǎn)的職責(zé)模擬與其相關(guān)的活動(dòng)。

在培養(yǎng)基灌裝前須準(zhǔn)備好方案和相關(guān)文件，應(yīng)對(duì)人員職責(zé)進(jìn)行方案說明，比如監(jiān)督和觀察職責(zé)如何實(shí)施；所有參與培養(yǎng)基灌裝的人員應(yīng)當(dāng)經(jīng)過適當(dāng)培訓(xùn)以保證他們對(duì)方案和實(shí)際實(shí)施有足夠的了解。

11.容器/密封件規(guī)格及切換

有些情況下同一生產(chǎn)線可能用于不同大小容器的灌裝。一般來說培養(yǎng)基灌裝可以針對(duì)規(guī)格較大和規(guī)格較小的容器進(jìn)行，除非其他不同規(guī)格容器的灌裝工藝有很大差別，在初始驗(yàn)證時(shí)可以進(jìn)行兩次大規(guī)格容器和一次較小規(guī)格容器的灌裝挑戰(zhàn)；在以后的周期性半年度灌裝可以輪換，每次挑戰(zhàn)一種規(guī)格，對(duì)于生產(chǎn)線切換不同規(guī)格產(chǎn)品的操作會(huì)增加污染，因此在驗(yàn)證時(shí)也要挑戰(zhàn)切換操作。

12. 容器/密封件系統(tǒng)的完整性測(cè)試

無菌容器/密封件系統(tǒng)的完整性測(cè)試可以在培養(yǎng)基灌裝時(shí)進(jìn)行，可以采用微生物侵入試驗(yàn)來評(píng)價(jià)密封完整性，即將灌裝了無菌培養(yǎng)基的容器按照實(shí)際生產(chǎn)的流程進(jìn)行密封后置于濃度不低于10⁶CFU/ml的菌懸液中，然后進(jìn)行培養(yǎng)檢查以評(píng)估系統(tǒng)的完整性。

13. 生物潔凈室培養(yǎng)基灌裝培養(yǎng)與檢查

①培養(yǎng)條件：應(yīng)對(duì)容器進(jìn)行翻轉(zhuǎn)、倒置等，確保培養(yǎng)基接觸容器( 包括密封件)的所有內(nèi)表面，培養(yǎng)時(shí)間至少14天；可選擇兩個(gè)溫度進(jìn)行培養(yǎng)：在20~25℃培養(yǎng)至少7天，然后在30~35℃培養(yǎng)至少7天；如選擇其他培養(yǎng)計(jì)劃，應(yīng)有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持所選培養(yǎng)條件的適用性，在整個(gè)培養(yǎng)期間應(yīng)連續(xù)監(jiān)控培養(yǎng)溫度。

②培養(yǎng)結(jié)束后，應(yīng)對(duì)所有模擬灌裝產(chǎn)品逐一進(jìn)行無菌性檢查，通常應(yīng)在合適的照度下進(jìn)行目視觀察。在培養(yǎng)期間定期觀察培養(yǎng)基的培養(yǎng)情況，如在培養(yǎng)期間發(fā)現(xiàn)異常情況時(shí)應(yīng)進(jìn)行進(jìn)一步調(diào)查； 如在檢查中發(fā)現(xiàn)密封缺陷的灌裝產(chǎn)品，應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)脑蛘{(diào)查并采取糾正措施。

③計(jì)數(shù)與數(shù)量平衡：為保證模擬試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，應(yīng)對(duì)各階段灌裝數(shù)量進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)，如灌裝數(shù)量、干預(yù)剔除數(shù)量、培養(yǎng)前和培養(yǎng)后無菌檢查數(shù)量，各階段數(shù)量應(yīng)平衡。如發(fā)現(xiàn)不平衡，應(yīng)調(diào)查原因并判斷本次模擬試驗(yàn)結(jié)果的有效性。

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